犬黑皮質(zhì)素受體-4突變體D298N真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在MDCK細(xì)胞中的表達(dá)

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摘要 ［目的］引進(jìn)犬MC4R突變點(diǎn)，構(gòu)建突變體D298N表達(dá)載體并在MDCK細(xì)胞中獲得表達(dá)。［方法］設(shè)計(jì)帶突變點(diǎn)D298N引物，以犬MC4R基因組DNA為模板，采用普通PCR和Overlap-PCR擴(kuò)增編碼區(qū)，將產(chǎn)物克隆、酶切、測序鑒定。將測序正確的基因連接到pcDNA3.1-myc-His/A載體上，將重組體pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D298N酶切、鑒定，將測序正確的重組體轉(zhuǎn)染到MDCK細(xì)胞中，繼續(xù)培養(yǎng)3 d，提取細(xì)胞總RNA，并采用RT-PCR方法檢測基因表達(dá)。（剩余9237字）