豬肺炎支原體解螺旋酶RuvA的原核表達(dá)、多克隆抗體制備及活性鑒定

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摘 要： 豬肺炎支原體的持續(xù)性感染問題頻發(fā)，同源重組介導(dǎo)的抗原變異扮演重要角色。解螺旋酶RuvA調(diào)節(jié)霍利迪連接體變構(gòu)是參與同源重組的關(guān)鍵步驟。鑒于此，本研究旨在原核表達(dá)豬肺炎支原體解螺旋酶RuvA重組蛋白，鑒定其DNA結(jié)合活性并制備多克隆抗體。試驗(yàn)通過分子克隆構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET21a-RuvA，經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)和純化獲得RuvAMhp重組蛋白；免疫家兔制備抗RuvAMhp多克隆抗體，再利用間接ELISA和Western blot試驗(yàn)進(jìn)行效價(jià)測(cè)定和特異性驗(yàn)證；利用凝膠遷移試驗(yàn)結(jié)合表面等離子共振技術(shù)分析RuvAMhp的DNA結(jié)合活性；利用凝膠遷移試驗(yàn)結(jié)合Western blot試驗(yàn)鑒定RuvAMhp的寡聚特性。（剩余18312字）