柑橘黃龍病PCR檢測(cè)技術(shù)優(yōu)化

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摘 要：為提高Jagoueix等建立的柑橘黃龍病PCR檢測(cè)體系的檢測(cè)效率和檢出率，本研究對(duì)基因組DNA提取、PCR體系和PCR程序進(jìn)行優(yōu)化，分析了不同萃取次數(shù)、裂解溫度和抗氧劑組合對(duì)總DNA質(zhì)量的影響，并設(shè)置不同引物濃度梯度和退火溫度梯度，研究其對(duì)檢測(cè)效果的影響。結(jié)果表明，萃取次數(shù)對(duì)DNA質(zhì)量基本無(wú)影響；水浴65 ℃裂解比常溫裂解提取的DNA質(zhì)量更優(yōu)，但總體差別不大；DNA提取液中添加β-巰基乙醇、β-巰基乙醇和PVP或者二者均不加入，對(duì)最終的基因組DNA的質(zhì)量和純度影響不大；引物濃度為0.4～1.0 μmol/L出現(xiàn)穩(wěn)定特征條帶，引物濃度為0.1 μmol/L時(shí)仍會(huì)產(chǎn)生引物二聚體；在66.5 ℃退火溫度下的檢測(cè)結(jié)果最優(yōu)。（剩余10691字）