西伯利亞鱘MHC Ⅱ β 克隆、原核表達(dá)和多克隆抗體制備

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摘要： 旨在構(gòu)建西伯利亞鱘（ Acipenser baerii）MHC Ⅱ β 基因原核表達(dá)載體高效表達(dá)，并進(jìn)行多克隆抗體的制備。根據(jù)GenBank西伯利亞鱘 MHC Ⅱ β 基因序列設(shè)計(jì)引物，并加上6-His標(biāo)簽和酶切位點(diǎn)，從西伯利亞鱘脾臟細(xì)胞中克隆可讀編碼框（不含信號(hào)肽）部分，克隆并測(cè)序鑒定后構(gòu)建Pet30α-MHCⅡβ質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21（DE3），異丙基硫代半乳糖苷 IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）、免疫印跡（Western Blot）鑒定，誘導(dǎo)表達(dá)的融合蛋白大小約為32 ku，能夠與His抗體結(jié)合，融合蛋白主要以包涵體形式存在，在溫度37 ℃時(shí)  1 mmol/L  的IPTG誘導(dǎo)4 h可以達(dá)到最佳表達(dá)量。（剩余9796字）