蝦類十足目虹彩病毒1（DIV1）LAMP-HNB快檢方法的建立

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摘要 ［目的］建立一種操作簡便、快速、可視化的蝦類病原檢測方法，實(shí)現(xiàn)基層養(yǎng)殖戶自檢。［方法］針對十足目虹彩病毒1（DIV1），設(shè)計(jì)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）特異性引物，對反應(yīng)試劑用量、溫度、反應(yīng)時(shí)間等條件進(jìn)行優(yōu)化，建立LAMP與羥基萘酚藍(lán)（HNB）結(jié)合的LAMP-HNB可視化快速檢測方法。［結(jié)果］在LAMP反應(yīng)體系中添加12 mmol/L Mg2+和250 μmol/L HNB，65 ℃恒溫條件下反應(yīng)60 min最佳；DIV1病原質(zhì)粒最低檢出限為102 copies/μL，穩(wěn)定性和特異性較好，通過帶有靶標(biāo)基因的陽性質(zhì)粒進(jìn)行16次重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果均較為穩(wěn)定，多種模板擴(kuò)增試驗(yàn)均未發(fā)生假陽性情況，符合試驗(yàn)要求。（剩余7883字）