毒害艾美耳球蟲疫苗ENYS株TaqMan qPCR檢測方法的建立靳浩展

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摘 要：為了對E. necatrix ENYS株在生產(chǎn)中進行質(zhì)控及對臨床應用效果的監(jiān)測， 該研究對ENYS株和ENGD株進行全基因組重測序， 結(jié)合生物信息學分析建立了一種TaqMan qPCR檢測技術(shù)。結(jié)果顯示， En?marker5測序結(jié)果與預期相符， 最優(yōu)的引物濃度和探針濃度分別為500 nM和250 nM， 標準曲線的斜率為-3.249， 相關(guān)系數(shù)為0.999， 可以通過Ct值對模板濃度定量， 該方法檢測下線為290個拷貝/反應和50個卵囊/反應， 靈敏度是傳統(tǒng)PCR的10倍；該方法可以特異性檢測EnYS株， 不能擴增其他種的疫苗株和野毒株以及腸道病原菌；重復性檢測的變異系數(shù)小于0.6%， 重復性良好。（剩余12604字）