多粘類芽孢桿菌中L-阿拉伯糖異構(gòu)酶的克隆表達(dá)及固定化研究

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摘要： 為了對D-半乳糖進(jìn)行異構(gòu)化制備D-塔格糖，從多粘類芽孢桿菌KF-1中克隆L-阿拉伯糖異構(gòu)酶基因，并在大腸桿菌BL21（DE3）細(xì)胞中表達(dá)； 重組蛋白PpoLAI通過鎳柱純化，并利用殼聚糖微球進(jìn)行固定化研究。結(jié)果表明： 使用D-半乳糖作為底物時，PpoLAI的最佳溫度和pH分別為50 ℃、 7.0； Mn2+顯著激活酶活性，當(dāng)Mn2+的濃度為0.8 mmol/L時，PpoLAI的活性最高；以D-半乳糖為底物的PpoLAI的米氏常數(shù)和分別為161.4 mmol/L及98.84 μmol/（mg·min）；PpoLAI的最優(yōu)固定化條件為殼聚糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%，戊二醛的體積分?jǐn)?shù)為3%，游離酶添加量為0.9 mg/g，吸附溫度為25 ℃，吸附時間為4 h，PpoLAI的固定化率為80.12%，固定化的PpoLAI的熱穩(wěn)定性、 pH穩(wěn)定性與游離酶相比有顯著提升。（剩余13090字）