基于牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒ORF61基因熒光定量檢測(cè)方法的建立

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摘 要：基于國內(nèi)流行的牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒（lumpy skin disease virus，LSDV）的基因組序列，建立了靶向ORF61基因的MGB探針熒光定量PCR檢測(cè)方法。本研究基于LSDV基因序列設(shè)計(jì)出帶有MGB探針的特異性熒光定量PCR引物，并進(jìn)行特異性和靈敏性篩選驗(yàn)證。最終，篩選得到靶向于LSDV ORF61基因的一對(duì)qPCR引物；利用pCAGGS-ORF61真核表達(dá)質(zhì)粒，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線y=-3.2875x+47.87，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9986，擴(kuò)增效率達(dá)101%；熒光定量PCR特異性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)和靈敏性試驗(yàn)結(jié)果表明，該引物的特異性高、重復(fù)性良好和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)；該引物的最低檢測(cè)限為6.71拷貝·μL-1，各批次內(nèi)與批次間重復(fù)性結(jié)果的變異系數(shù)均小于2%。（剩余14687字）