煙草花葉病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)體系的構(gòu)建

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摘要 ［目的］防止隱癥攜帶煙草花葉病毒（TMV）的煙苗移栽到大田造成產(chǎn)量損失。［方法］根據(jù)TMV的外殼蛋白（coat protein，CP）基因保守序列設(shè)計(jì)引物及探針，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線、重復(fù)性、特異性及靈敏性分析，建立了一種TMV的TaqMan-qPCR檢測(cè)方法。［結(jié)果］該方法特異性好，與其他常見的煙草病毒無(wú)交叉反應(yīng)；靈敏度高，檢測(cè)下限可達(dá)到4.53×101 copies/μL，比常規(guī)RT-PCR檢測(cè)靈敏度提高了10倍；建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率為-3.299，決定系數(shù)（R2）為0.993 3，擴(kuò)增效率為100.97%，且循環(huán)閾值（Ct）與質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品濃度之間線性關(guān)系良好，重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果可靠。（剩余10666字）