基于CRISPR-Cas9 技術(shù)建立CSE1L 基因敲除C2C12 細(xì)胞

打開文本圖片集

摘要：為研究染色體分離樣蛋白1（chromosomesegregation 1-like，CSE1L）在小鼠骨骼肌發(fā)育中的作用，利用CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)構(gòu)建CSE1L 基因敲除的C2C12細(xì)胞系。針對小鼠 CSE1L 的第3外顯子設(shè)計(jì)3組sgRNA，構(gòu)建sgRNA表達(dá)質(zhì)粒（連接綠色熒光蛋白，green fluorescent protein，GFP）和Cas9質(zhì)粒（連接紅色熒光蛋白，red fluorescent protein，RFP）共轉(zhuǎn)染C2C12 細(xì)胞，篩選高切割效率的sgRNA；將轉(zhuǎn)染該sgRNA 和Cas9 的C2C12細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞分選，獲取共表達(dá)紅、綠雙色熒光蛋白的細(xì)胞，并用DNA測序進(jìn)行鑒定。（剩余14937字）