口蹄疫病毒Asia1型豬源中和抗體的篩選與抗原表位鑒定

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摘 要： Asia1型口蹄疫病毒（FMDV）仍然在我國周邊國家存在，對我國畜牧業(yè)造成長期威脅。本研究旨在利用單個B細胞抗體技術研制Asia1型FMDV的中和性單克隆抗體，以此為工具，鑒定Asia1型FMDV的保護性抗原位點。以FMDV Asia1/JS/05為誘餌抗原，通過流式細胞術分選免疫豬PBMCs中的抗原特異性B細胞，通過巢式PCR擴增單個B細胞IgG抗體重鏈與輕鏈可變區(qū)基因序列，分別構建IgG抗體重鏈與輕鏈表達質(zhì)粒，將其共轉(zhuǎn)染CHO-S細胞進行抗體表達；通過間接ELISA、間接免疫熒光試驗（IFA）、病毒中和試驗（VNT）驗證抗體反應性和中和活性，利用免疫印跡、中和抗體逃逸突變株篩選鑒定中和抗體所識別的抗原表位類型和抗原表位關鍵氨基酸。（剩余18047字）