雞球蟲(chóng)病7價(jià)多表位嵌合重組抗原ET seven真核質(zhì)粒的構(gòu)建、表達(dá)及其初步功能分析

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摘 要： 為構(gòu)建以雞柔嫩艾美耳球蟲(chóng)EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相關(guān)蛋白分子為抗原基礎(chǔ)的多表位嵌合重組抗原ET seven真核表達(dá)質(zhì)粒，同時(shí)驗(yàn)證其在DF-1細(xì)胞中的表達(dá)和通過(guò)不同輔助遞送方式在雞體內(nèi)的表達(dá)及其免疫功能。本研究利用生信分析獲得7個(gè)抗原表位，分別提取柔嫩艾美耳球蟲(chóng)不同發(fā)育階段蟲(chóng)體總RNA，通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增獲得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7個(gè)抗原的表位區(qū)域編碼基因，構(gòu)建基因圖譜由公司合成以pcDNA3.1（+）為真核表達(dá)載體，構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-ET seven；將鑒定陽(yáng)性、測(cè)序正確的質(zhì)粒pcDNA3.1-ET seven轉(zhuǎn)染至DF-1細(xì)胞，利用RT-PCR和Western blot方法檢測(cè)ET seven重組基因片段在DF-1細(xì)胞中的表達(dá)；以磷酸鈣納米顆粒作為輔助質(zhì)粒遞送佐劑檢測(cè)pcDNA3.1-ET seven在雞體內(nèi)引起的細(xì)胞因子水平變化，間接ELISA檢測(cè)特異性IgG抗體水平。（剩余23432字）