馬鈴薯 StCYP83B1基因過表達(dá)載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化

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摘  要  旨在為解析馬鈴薯  StCYP83B1基因的免疫功能提供重要材料基礎(chǔ)，從四倍體馬鈴薯栽培種‘大西洋’的cDNA中克隆到  StCYP83B1基因，將其與融合mCherry標(biāo)簽的35S：：pART27重組載體連接，構(gòu)建p35S：：StCYP83B1-mCherry植物過表達(dá)載體，并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的本氏煙瞬時(shí)表達(dá)體系確認(rèn)該蛋白的表達(dá)；利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的馬鈴薯遺傳轉(zhuǎn)化方法，將p35S：：StCYP83B1-mCherry轉(zhuǎn)入馬鈴薯中，隨機(jī)挑選3株轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行鑒定：PCR檢測證明 StCYP83B1已整合到馬鈴薯基因組中，反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR檢測表明 StCYP83B1在轉(zhuǎn)化植株中的轉(zhuǎn)錄水平比未轉(zhuǎn)化的對照植株上調(diào)40～49倍，免疫印跡檢測表明StCYP83B1蛋白可以在轉(zhuǎn)化植株中正常表達(dá)。（剩余15015字）