牛冠狀病毒S1蛋白的真核表達(dá)及間接ELISA方法的建立與應(yīng)用

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摘 要： 為建立一種檢測牛冠狀病毒（BCoV）的抗體間接ELISA檢測方法，本研究利用昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)BCoV的S1蛋白，并作為包被抗原，建立BCoV的S1蛋白抗體間接ELISA檢測方法，應(yīng)用于臨床樣品檢測。結(jié)果顯示，S1蛋白大小約100 ku，可表達(dá)于昆蟲High5細(xì)胞培養(yǎng)基上清，經(jīng)Western blot鑒定S1蛋白抗原性良好；經(jīng)反應(yīng)條件優(yōu)化，確定抗原包被濃度為0.125 μg·mL-1，血清稀釋度為1∶200；采用1%明膠，于37 ℃封閉3 h；血清樣品于37 ℃孵育30 min；酶標(biāo)二抗的稀釋度1∶25 000，37 ℃孵育45 min；37 ℃避光顯色13 min；臨界值為0.297；經(jīng)檢驗，該方法特異性良好；批間及批內(nèi)變異系數(shù)均小于10％。（剩余20517字）