橡膠樹棒孢霉落葉病菌酵母單雜交cDNA文庫及CcCas5啟動子誘餌載體的構(gòu)建

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摘要為了篩選出與CcCas5啟動子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子，本研究構(gòu)建了橡膠樹棒孢霉落葉病菌的酵母單雜交cDNA表達(dá)文庫和CcCas5啟動子誘餌載體， 并對3-氨基-1，2，4-三唑 （3-amino-1，2，4-triazole，3-AT）的最佳抑制濃度進(jìn)行了篩選。結(jié)果顯示，構(gòu)建的酵母單雜交cDNA表達(dá)文庫總?cè)萘繛?.49×106 cfu，插入片段主要分布于750～2 000 bp之間，重組率為95.8%;克隆了CcCas5基因2 600 bp的啟動子序列，預(yù)測獲得真菌主要的10大類轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)165個;構(gòu)建了分別攜帶1 500 bp和1 000 bp啟動子序列的酵母單雜交啟動子誘餌載體，10 mmol/L的3-AT能抑制pHis2.1-pCcCas5-1000和pHis2.1-pCcCas5-1500的背景表達(dá)。（剩余14863字）