微小RNA-199a-3p對小鼠皮膚瘢痕疙瘩成纖維細胞的抑制作用及其機制

打開文本圖片集

摘要：目的 探討微小RNA-199a-3p（miR-199a-3p）對小鼠皮膚瘢痕疙瘩成纖維細胞的調(diào)控作用及其作用靶基因。方法 構(gòu)建小鼠皮膚瘢痕疙瘩模型，采用實時熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測miR-199a-3p、瘢痕疙瘩相關(guān)基因和Smad1的mRNA表達。原代分離和體外培養(yǎng)成體C57BL/6小鼠皮膚成纖維細胞；利用脂質(zhì)體將miR-199a-3p模擬物和Smad1 siRNA轉(zhuǎn)染至小鼠皮膚成纖維細胞中；雙熒光素酶報告實驗驗證miR-199a-3p的靶基因；Cell Counting Kit-8（CCK8）方法驗證miR-199a-3p和沉默Smad1對皮膚成纖維細胞增殖的影響；RT-qPCR和Western blot法分別檢測過表達miR-199a-3p皮膚成纖維細胞的瘢痕疙瘩相關(guān)基因和Smad1的mRNA和蛋白表達；Western blot檢測小鼠皮膚成纖維細胞分別轉(zhuǎn)染Smad1 siRNA和miR-199a-3p模擬物后瘢痕疙瘩相關(guān)基因、Smad1的蛋白表達。（剩余14337字）