過表達SIRT4 對骨肉瘤細胞惡性生物學(xué)行為及能量代謝的影響

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【摘 要】目的：探討過表達SIRT4對人骨肉瘤細胞惡性生物學(xué)行為及對成骨分化的調(diào)控作用，以及過表達SIRT4對線粒體能量代謝的影響。方法：構(gòu)建穩(wěn)定過表達SIRT4 的U2OS、MG63 骨肉瘤細胞株，通過qRT-PCR 和Western blot 檢測SIRT4 的mRNA和蛋白表達水平；CCK-8、克隆形成實驗、EDU555染色法及檢測細胞增殖；裸鼠脛骨成瘤實驗檢驗成瘤能力；流式細胞術(shù)檢測細胞周期；DAPI染色及Annexin V-APC/7-AAD雙染法檢測細胞凋亡；細胞劃痕實驗、Transwell實驗檢測細胞遷移及侵襲能力；堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）染色和茜素紅S染色分別檢測細胞的早期和晚期成骨分化；葡萄糖檢測試劑盒測定培養(yǎng)基及細胞內(nèi)葡萄糖含量；乳酸檢測試劑盒測定培養(yǎng)基及細胞內(nèi)乳酸含量；三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）檢測試劑盒檢測細胞總ATP含量；四甲基羅丹明酯染色（tetramethylrhodamine ethylester perchlorate，TMRE）測定試劑檢測線粒體膜電位。（剩余15843字）